制備型液相色譜，按照色譜柱和樣品量的大小，可以分為：低壓液相色譜、中壓液相色譜和高壓液相色譜。

低壓、中壓與高壓液相色譜的壓力范圍之間會存在一定交疊，沒有統(tǒng)一、明確的標(biāo)準(zhǔn)。下面我們來簡單介紹。

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1. 低壓色譜（LPLC）

? ? ?柱壓一般低于5bar（或者75psi）。

???? 低壓色譜一般是由蠕動泵、進(jìn)樣閥和檢測器組成，可以連續(xù)化，實(shí)現(xiàn)自行的梯度淋洗和餾分收集等操作。色譜柱管一般是玻璃的，長度一般為240

，內(nèi)徑為10

。填料一般使用軟質(zhì)的葡聚糖、瓊脂糖、纖維素、聚合物等，粒徑一般為40-130μm。

2. 中壓液相色譜（MPLC）

? ??柱壓在5-20bar（或75-300psi）之間，廣泛用于實(shí)驗(yàn)室和工業(yè)規(guī)模的生物制品（如動物臟器提取液、濃縮液、體液、植物提取液、生物技術(shù)發(fā)酵液等—往往需要經(jīng)過濾膜作初級凈化）的處理，以提取或純化所需的產(chǎn)品。

中壓液相色譜的主要部件為輸液泵、進(jìn)樣閥、檢測器、餾分收集器等。慧德易公司自主研發(fā)的QuikSep AutoBio全自動層析系統(tǒng)是為實(shí)驗(yàn)室級別生物制品純化工藝開發(fā)及制備專門設(shè)計(jì)而成。采用堆疊式管路設(shè)計(jì)，實(shí)現(xiàn)最小的管路死體積，所有閥門、柱塞泵、檢測器均采用模塊化方式，可進(jìn)行密集的程序化方法探索，實(shí)現(xiàn)儀器最大智能化。

對于一般中壓制備色譜，當(dāng)色譜柱直徑較大時，柱頭往往設(shè)計(jì)成錐形或有類似于傘狀的液流導(dǎo)向結(jié)構(gòu)，使得當(dāng)大量樣品進(jìn)入到柱頭上時，能迅速地分散到整個柱橫截面上，及時被流動相沖走，避免了因樣品的局部過濃而引起柱超負(fù)荷和譜帶加寬。柱子填料則采用比較耐壓的交聯(lián)改性的多糖凝膠（如Sepharose CL，Superose等），聚合物微球，復(fù)合材料介質(zhì)或硬質(zhì)SiO₂基體的化學(xué)鍵合相等，粒徑一般在20-60μm（最常用的填料尺寸是15-25μm，25-40μm或40-60μm），可采用濕法或者干法裝柱。

3. 高壓液相色譜（HPLC）

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是指柱壓一般大于20bar（或300psi）的“高壓（高效）液相色譜”，通常指所用色譜柱的塔板數(shù)大于2000，一般是在2000-20000的范圍之間。

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當(dāng)需要從大量的物質(zhì)中分離純化不足1%的所需成分時，分離工作將會十分困難，往往在純化的最后階段需要使用10μm或更小顆粒的高效填料。為獲得所需微量組分，可采用如下分離手段：制備型分離-半制備型分離-分析型分離-產(chǎn)物。為提高每次分離獲得純品的數(shù)量，制備型高效液相色譜分離通常在超載情況下運(yùn)行。

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??? 高壓液相色譜，即目前常用的高效液相色譜。色譜柱內(nèi)裝填的是粒度范圍較窄的微小顆粒固定相（5-30μm），為使流動相流出，需采用較高的壓力，同時系統(tǒng)的復(fù)雜性及成本亦增大，但分辨率可得到較大的提高。而裝填較大顆粒的固定相時，如中壓液相色譜系統(tǒng)，裝柱較容易，色譜柱的通透性較高（只需較低的泵壓力），可采用更大的色譜柱和更經(jīng)濟(jì)的儀器，由此分辨率也較低。

4. 用分析型高壓液相色譜進(jìn)行制備型分離

? ??當(dāng)所需純化合物的量很少時（微克級至幾微克），可用分析型色譜柱進(jìn)行多次分離。效果和利用大直徑色譜柱進(jìn)行一次性分離相同。采用小直徑色譜柱時，可利用已有的分析型儀器，而無需在色譜柱、填料及附件方面投入更大資金；另外，還可在很大程度上避免由于放大所產(chǎn)生的問題，使分離速度加快。

??? 小直徑色譜柱的尺寸一般為4.6×250mm，通常裝有反相填料，每次可進(jìn)樣5-100μg，通常多次進(jìn)樣分離，可獲得足夠的純品。

通常需用分析型色譜柱進(jìn)行分離的一個領(lǐng)域是對多肽類化合物的純化。生物活性肽的含量通常很低，用分析型高效液相色譜作為最后的純化手段時，不會使色譜柱超載。為了提高分離效率，可將分析型高效液相色譜柱串聯(lián)起來使用。此時可采用顆粒度在20-30μm的填料，以保持適當(dāng)?shù)耐ㄍ感裕绕涫钱?dāng)使用含水溶劑時。當(dāng)使用正己烷等有機(jī)溶劑時，由于流動相的粘度較低，可使用顆粒度為10μm的填料。然而由于分析型色譜系統(tǒng)無法提供大規(guī)模制備型分離所需的流速，其應(yīng)用受到一定限制。

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??? 北京慧德易科技有限責(zé)任公司致力于為天然產(chǎn)物、化學(xué)合成藥物以及生物制藥等相關(guān)企業(yè)及科研院校提供專業(yè)和高品質(zhì)的分離樹脂、純化介質(zhì)、高效液相色譜柱，以及全套的分析液相、中高壓制備液相、DAC、工業(yè)層析操作系統(tǒng)和層析柱，為客戶提供從小試、中試及生產(chǎn)全套設(shè)備及工藝開發(fā)和整體解決方案。

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